Anilin mavisi boyasının farklı fiksatiflerle uygulanması ile sperm kromatin kondansasyonunun incelenmesi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: İstanbul Yeni Yüzyıl Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, HİSTOLOJİ VE EMBRİYOLOJİ ANABİLİM DALI, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2018
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: TUĞÇE DURMUŞ
Danışman: TÜLAY İREZ
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Amaç: Sperm kromatini DNA ve nükleer proteinlerinin sıkı bağ yapması ve kompaktlaşması ile düzenlenmektedir.Bu kompaktlaşma sonrası normal kişilerde yaklaşık olarak %85-%15 protamin ve histon olacak şekilde nükleer protein yapısı kurulmaktadır.Yapılan çalışmalar sperm nukleusundaki protamin ve histon düzeyinin DNA hasarları ve infertilite ile yakın ilişkisi olduğunu göstermiştir. Bu çalışmada klasik histon boyama yöntemi olan Anilin mavisi yönteminin dört farklı fiksatif uygulayarak kantitatif olarak kromatin kondansasyon oranlarını ne düzeyde etkilediğini araştırmayı amaçladık. Materyal Metod: Bu çalışmada 42 semen örneğinde yayma preparatlar yapılarak ,her örnek için 4 ayrı semen yayması hazırlandı . Bu preparatlar ,glutaraldehit (%2,5), Formaldehit (% 10), Etil alkol (%98) ve metanol+asetik asit (3/1) ile fikse edildi.Fikse edilen her örnek asidik anilin mavisi ile 7 dakika boyandı ve fosfat tampon ile yıkandı, kurutuldu ve immersiyon objektifinde incelendi . Analiz için her preparatta 200 sperm sayıldı,boya alan ve almayan sperm oranları çıkarıldı.Farklı fiksatifler arasında kromatin kondansasyon(anilin negatif) oranları arasındaki farklılıkları hesaplama amacı ile student's -T testi ve tekrarlı ölçümlerde varyans analizi uygulandı. Bulgular: Dört fiksatif arasından Glutaraldehit ve Formaldehit arasında pozitif korelasyon( p=0,051), Glutaraldehit ve formaldehit ile methanol+asetik asit ve alkol fiksasyonu arasında negatif korelasyon bulunmuştur (p==,0005,p=0,0005 ve p=0,0005, p=0,007). Tartışma: Bu çalışmada elde edilen sonuçlara göre sperm kromatin kondansasyonu için uygulanabilecek olan boya Anilin mavisi boyası için hücrelerin % 2,5 Glutaraldehit ve %10 formaldehit fiksasyonunun uygun olabileceği , metanol+asetik asit ve etil alkol fiksasyonunun ise uygun olmadığı kanısına varılmıştır.