Amaç: Mortalitesi en yüksek jinekolojik kanser olan over kanserinin tedavisindeki asıl problem nüks ve kemoterapi direncidir. Kanser dokusunda, patogenezisden sorumlu tutulan, artmıs büyüme potansiyeline sahip, uzun ömürlü hücre popülasyonu kanser kök hücreleri (KKH) olarak adlandırılırlar. KKH’lerinin kemo-rezistans ve agresif tekrarlayan tümörlerden sorumlu olduğu düsünülmektedir. Normal kök hücreden farklılasarak kanser dokusunu olusturan bu hücreler in-vitro kosullarda Multisellüler Tümör Sferoid Model (MTS) kullanılarak izole edilmektedirler. Bu çalısmada yüksek anti-tümör aktivitesine sahip, deoksisitidin analoğu Gemcitabine (2′2′-difluorodeoxycytidine, Gemzar®)’nin KKH’leri üzerinde anti-apoptotik etkileri incelenmistir. Yöntem ve Gereç: MDAH-2774 insan over kanseri hücre hattından üç boyutlu hücre kültürü ile KKH izolasyonu yapılmıs ve sferoidler Gemcitabine ile etkilestirilmistir. 24. ve 96. saatlerde ilaçla etkilesen hücrelerdeki apoptotik değisiklikler p53, bcl-2, caspase-3 immunoreaktivitesiyle değerlendirilmistir. Bulgular: p53 immunoreaktivitesi açısından Gemcitabine uygulanan grupta 24. ve 96. saatlerde artıs görülmektedir. 24. saatlerde Gemcitabine uygulanan grupta bcl-2 immunoreaktivitesi azalmısken, 96. saatte 24. saate oranla bcl-2 belirgin artmıstır. Caspase-3 immunoreaktivitesi 24/96 saat arasında her iki grupta azalırken, 96. saatte Gemcitabine grubunda caspase-3’te azalma görülmüstür. Sonuç: p53 immunoreaktivitesinde artıs ile bcl-2’deki azalma ilaç etkinliğinin bu apoptotik yolakları kullanarak gerçeklestiğini düsündürürken, caspase-3’de beklenen artısın olmaması caspase yolağının kullanılmadığını düsündürmektedir. Bugüne kadar ilaç duyarlılık testleri ve KKH üzerine etki mekanizmaları arastırma deneyleri tek tabaka hücre kültürleri ile değerlendirilmistir. Bu arastırmaların KKH izolasyon tekniği kullanılarak değerlendirilmesi uygun olacaktır.
Aim: A major problem in the treatment of ovarian cancer, which has the highest mortality rates among gyneacological malignancies, is recurrence and chemoresistance. In the cancer tissue, this population of long-lived cells with extraordinary expansion potential has been called tumor initiating cells or cancer stem cells (CSCs). It is thought that CSCs are responsible for these aggressive and recurrent tumors. These cells that differentiate from normal stem cells and form tumor tissue are isolated in-vitro via the Multicellular Tumor Spheroid Model. In this study, Gemcitabine (2′2′-difluorodeoxycytidine, Gemzar®), which is a deoxycytidine analog with excellent antitumor activity has been used for its anti-apoptotic effects.. Material and Methods: CSC isolation was been performed in-vitro three dimensional cell cultures from MDAH-2774 ovarian CSC line and acts of Gemcitabine were determined. CSCs treated at 24th and 96th hours were analyzed for apoptotic alterations with p-53, bcl-2, and caspase-3 immunoreactivity. Results: For the Gemcitabine group, p53 immunoreactivity increased at 24th and 96th hours and bcl-2 decreased at the 24th hour while an apparent increase was determined at 96th hours. Caspase-3 decreased for both groups at 24/96 hours while caspase-3 revealed decrease at 96th hours. Conclusion: Increase in p53 immunoreactivity as well as decrease in bcl-2 display that drug activity is through these pathways while caspase-3 pathway is not active. Therefore, the expected increase could not be assessed. Until now, drug sensitivity tests and effects on CSCs have been evaluated with monolayer cell culture systems. It is appropriate to evaluate these studies with CSCs isolation technique.
